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        1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯免疫分析(ELISA試劑盒使用說明書

        發布時間:2023/7/14 8:53:25      閱讀次數:405

         1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯免疫分析(ELISA試劑盒使用說明書

        本試劑盒僅供研究使用.

        使用目的:

        本試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體樣本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

        實驗原理

        本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)水平.用純化的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗體包被微孔板,制成固相體,往包被單抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG),和HRP標記的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗原,使它們競爭結合,,經過徹底洗滌后底物TMB顯色.樣本顏色的深淺和樣品中的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.  

        試劑盒組成

        1

        30倍濃縮洗滌液

        20ml×1

         

         

        8

        標準品S11600pg/ml

        0.5ml×1

        2

        酶標試劑

        6ml×1

        標準品S2800pg/ml

        0.5ml×1

        3

        酶標包被板

        12×8

        標準品S3400pg/ml

        0.5ml×1

        4

        顯色劑A

        6ml×1

        標準品S4200pg/ml

        0.5ml×1

        5

        顯色劑B

        6ml×1

        標準品S5100pg/ml

        0.5ml×1  

        6

        終止液

        6ml×1/

        9

        說明書

        1

        7

        樣品稀釋液

        6ml×1/

        10

        封板膜

        2

         

        標本要求 

        1.標本處理:(1)水樣   采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查

        2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(52570 V:V:V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查

        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.

        操作步驟

         

        1. 加樣:分別設標準孔 空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 待測樣品孔.在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍).加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.

        2. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.

        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘.   

        4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干.

        6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

        7. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色).

        8. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值). 測定應在加終止液后15分鐘以內進行.

         

        計算

          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度.

        注意事項

        1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.

        2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.

        3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差.一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣.

        4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔.如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5).

        5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

        6.底物請避光保存.

        7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

        8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.

        9.本試劑不同批號組分不得混用.

        檢測范圍:

        30pg/ml-1800pg/ml

        規格:

        96/

        保存條件及有效期

        1試劑盒保存:;2-8.

        2.有效期:6個月


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