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        人地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)酶聯免疫分析試劑盒

        發布時間:2023/7/14 8:53:43      閱讀次數:519

         地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

        本試劑盒僅供研究使用.

                                                                             96T

         

        使用目的:

        本試劑盒用于測定人血清 血漿及相關液體樣本中地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)表達.

        實驗原理

        本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)表達.用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后底物TMB顯色.TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)的存在與否.

        試劑盒組成

        1

        30倍濃縮洗滌液

        20ml×1

        7

        終止液

        6ml×1

        2

        酶標試劑

        6ml×1

        8

        陽性對照

        0.5ml×1

        3

        標包被

        12孔×8

        9

        陰性對照

        0.5ml×1

        4

        樣品稀釋液

        6ml×1

        10

        說明書

        1

        5

        顯色劑A

        6ml×1

        11

        封板膜

        2 

        6

        顯色劑B

        6ml×1/

        12

        密封袋

        1

        標本要求 

        1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

        2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.

        操作步驟

        1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2陽性對照2孔 空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

        2. 加樣:分別在陰 陽性對照孔中加入陰性對照 陽性對照50μl.然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.   

        4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干.

        6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.

        7. 溫育:操作同3.

        8. 洗滌:操作同5.

        9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

        10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色).

        11. 測定:以空白調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值). 測定應在加終止液后15分鐘以內進行.

         

        計算和結果判定:

          試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.20

          臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

          陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)陰性

          陽性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)陽性.

        注意事項

        1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用.

        2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.

        3濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.

        4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

        5.底物請避光保存.

        6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

        7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全.

        保存條件及有效期

        1試劑盒保存:;2-8.

        2.有效期:6個月

         


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